麻痹性貝類毒素(PSP)檢測試劑盒的詳細信息

1．概述本檢測采用酶聯(lián)免疫法定量檢測麻痹性貝類毒素的存在。神經(jīng)性貝毒是一種毒素，石房蛤毒素是麻痹性貝類毒素的一種。本檢測可用于水產(chǎn)樣本對貝類毒素的定性和定量檢測，例如甲殼類動物的樣本。對于甲殼類動物的需要提前制備樣本。如果條件允許，陽性樣本可以做HPLC，GC/MS或其他方法確認。2．安全性說明標準品溶液含有少量的石房蛤毒素。底物溶液含有四甲基聯(lián)苯胺，終止液還有稀硫酸。避免皮膚與粘膜與終止液接觸。若終止液與皮膚接觸，可用水洗去。3．貯藏與穩(wěn)定性試劑盒貯存在4-8 °C。使用前試劑盒中溶液要恢復到室溫（20 —25度）。在保質(zhì)期內(nèi)試劑盒都可以正常使用。4．檢測原理本實驗采用直接競爭ELISA方法，用特異性抗體識別石房蛤毒素。樣本中的石房蛤毒素可與石房蛤毒素-酶結(jié)合物競爭，同包被在微孔板上的兔抗-石房蛤毒素抗體結(jié)合。石房蛤毒素抗體與包被在微孔底部的二抗結(jié)合。洗板后加入底物溶液，顯藍色。藍色的深度與石房蛤毒素在樣本中的濃度成反比。顏色反應(yīng)在規(guī)定時間內(nèi)終止，顏色用酶標儀讀值。每孔的樣本濃度值可以通過標準曲線來讀取。5．試劑盒局限性和可能的干擾樣本中經(jīng)常存在的大量的無機物和有機物經(jīng)檢測，并未為發(fā)現(xiàn)影響試劑盒的檢測結(jié)果。然而，由于樣本中發(fā)現(xiàn)有易變質(zhì)的混合物，由它們引起的基質(zhì)反應(yīng)不可避免地會影響檢測結(jié)果。操作失誤也可能造成實驗錯誤。如：貯存的問題。加樣次序錯誤，加入溶液的體積錯誤，孵育的時間過長或者過短，影響免疫反應(yīng)或者底物反應(yīng)，實驗過程中溫度過低或者過高（低于10℃，大于30℃）。本試劑盒提供篩查神經(jīng)性貝毒的篩查結(jié)果。陽性樣本可采取其他的分析方法（GC,HPLC，其他方法）證明。A.試劑盒組成1．真空包裝微孔板 （12 × 8條），包被一種羊抗兔二抗2．標準液（6）：0, 0.02, 0.05, 0.1,0.2 和0.4 ng/mL (ppb) 3．1 瓶6mL抗體（兔抗石房蛤毒素抗體）4．1 瓶6mL石房蛤毒素-HRP酶標記物5．2瓶25ml樣品稀釋緩沖液(10倍濃縮)(即用即配，例如：10ml濃縮緩沖液 90ml蒸餾水)6．1瓶100ml洗板緩沖液(5倍濃縮) (即用即配，例如：10ml濃縮緩沖液 40ml蒸餾水)7．1 瓶12 mL 底物（顯色液TMB）8．1 瓶 12mL 終止液B.操作步驟1、在對應(yīng)的微孔中加入50μL的標準和樣品（推薦做2-3個重復）2、每個測試孔都加入50 μL 石房蛤毒素酶標記物溶液。3、每個測試孔都加入50 μL石房蛤毒素抗體溶液，用封口膜把微孔板蓋上，輕輕的震蕩微孔板30秒使里面的液體混勻。不要使液體灑出。4、在室溫下孵育30分鐘。5、孵育完成后，把封口膜取掉，將微孔中的溶液用力地倒入水槽中，用1 X的洗液洗板3次，每孔每次至少加入250 μL1 X的洗液。拍板，去掉殘留的洗液。6、每個測試孔加入100μL的顯色液（底物）。封口膜把微孔板蓋上，輕輕的震蕩微孔板30秒使里面的液體混勻。不要使液體灑出。室溫孵育20-30分鐘，此步驟避免太陽光照射。7、每個測試孔加入100μL終止液。8、用酶標儀在450nm 下讀取每個孔的吸光度值（OD）（在加入終止液15分鐘內(nèi)完成）。C 結(jié)果分析結(jié)果分析可以利用商業(yè)ELISA分析軟件(4-parameters,Logit/Log)。手工計算可以先計算標準的吸光度值的平均值，然后計算每個標準的%B/B0（用其它標準的吸光度值除以零標準的吸光度值乘以100%）。以每個標準的%B/B0做Y軸，以每個標準的石房蛤毒素的濃度做X軸構(gòu)建標準曲線。通過利用標準曲線，把樣品的%B/B0代入標準可以計算出樣品中岡田酸的濃度。樣品中石房蛤毒素的含量小于0.02 ppb認為陰性。當樣品中石房蛤毒素的含量大于0.4 ppb要稀釋后再測定。