乳制品中三聚氰胺的液相色譜檢測法
乳制品中三聚氰胺的液相色譜檢測法
三聚氰胺（Melamine）是一種重要的三嗪類含氮雜環化工原料，主要用于生產三聚氰胺-甲醛樹脂，廣泛用于木材加工、塑料、涂料、造紙、紡織、皮革等行業，為白色晶體。三鹿奶粉引發了對三聚氰胺檢測的廣泛關注，質量監督檢驗檢疫總局和標準化管理委員會相繼發布了《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》（GB/T22388-2008）和《原料乳中三聚氰胺快速檢測 液相色譜法》（GB/T22400-2008）的標準。本文參考了以上標準并進行配制條件優化，建立了乳制品中三聚氰胺的液相色譜檢測法，前處理簡單，檢測限、精密度、重現性以及回收率均合標準。
1 實驗部分
1.1 儀器與試劑
501-HPLC液相色譜儀（含UV501紫外-可見檢測器1臺，P501高壓恒流泵1臺，杭州賽析科技有限公司）；DT-230A色譜柱溫箱；FA2004分析天平（上海舜宇恒平科學儀器有限公司）；TGL-16G-A離心機（上海安亭科學儀器廠）；三聚氰胺標準品(>99%，上海安譜)；辛烷磺酸鈉(色譜純，北京百靈威)；磷酸(分析純)、乙腈(色譜純，美國Tedia)、純凈水(杭州娃哈哈)。
1.2 標準品溶液配制
精密稱取三聚氰胺標準品，溶于50％的甲醇水溶液，配制稱1.422mg/ml的標準儲備液，于4℃避光保存。根據實驗需要，用流動相逐級稀釋成適當濃度的標準工作液。
1.3 樣品前處理
稱取2g酸奶樣品與50ml具塞離心管中，加入乙腈：水＝50：50混合溶液15ml，充分混勻后聲提取15min。取提取液250ul，加入0.1mol/l鹽酸750ul，混勻，以12000r/min離心5min，取上清液，0.22um濾膜過濾，作為HPLC測定溶液。
1.4 色譜條件：
色譜柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)
流動相：乙腈/緩沖鹽=15/85（緩沖鹽：10mM辛烷磺酸鈉水溶液，含0.1％磷酸）
流速：1.0ml/min
波長：240nm
溫度：40℃
進樣量：20μl
2 實驗結果
2.1 精密度實驗
取濃度為0.569μg/ml三聚氰胺標準工作液，按上述色譜條件，連續進樣5次，以各成分峰面積計算RSD(%)，所得結果如表1所示：保留時間相對標準偏差（RSD）為0.23％，峰面積RSD為0.57％。
表1 精密度實驗
. Retention time（min） Peak High Peak Area
1 11..8
2 11..2
3 11..0
4 11..8
5 11..6
RSD(%) 0.23 0.82 0.57
圖1 三聚氰胺標準品
2.2 標準曲線
配置濃度分別為0.142、0.284、0.853、1.422、7.110、14.220μg/mL的三聚氰胺標準工作液。將以上6種標準工作液在上述色譜條件下按濃度由高進樣。用小二乘法以對照品濃度(橫坐標X軸，µg/ ml)對峰面積(縱坐標Y軸)進行線性回歸，求算標準曲線。
2.2 加樣回收率和重現性實驗
取已知三聚氰胺含量的酸奶樣品，加入量的標準儲備液，按“樣品前處理” 操作，平行制備3份，得到樣品溶液后按上述色譜條件進樣分析，得到加樣回收率及重現性結果，見表2。 Spiked(mg/kg) Recovery(%) RSD(%)
35.0 87.2 1.37
圖2 空白酸奶樣品
圖3 加酸奶樣品
2.2 檢測限及定量限
依據噪聲值，按3倍信噪比，計算其理論檢出限，為0.221 mg/kg；按10倍信噪比，計算其定量限，為0.738 mg/kg。
3 結論
本方法優化了液相色譜法檢測乳制品中三聚氰胺測定方法，該方法簡化了前處理步驟，易于操作，線性關系良好，有較好的精密度和重現性，回收率滿足標準的要求，檢出限和定量限也合目前三聚氰胺的檢測要求。
相關資料：飼料中三聚氰胺液相色譜儀
