一、基本原理
酶聯(lián)免疫（ELISA）是免疫酶技術的一種，是將抗原抗體反應的特異性與酶反應的敏感性相結合而建立的一種新技術。
ELISA的技術原理是：將酶分子與抗體（或抗原）結合，形成穩(wěn)定的酶標抗體（或抗原）結合物，當酶標抗體（或抗原）與固相載體上的相應抗原（或抗體）結合時，即可在底物溶液參與下，產(chǎn)生肉眼可見的顏色反應，顏色的深淺與抗原或抗體的量成比例關系，使用ELISA檢測儀，即酶標儀，測定其吸收值可做出定量分析。此技術具有特異、敏感、結果判斷客觀、簡便和安全等優(yōu)點，日益受到重視，不僅在微生物學中應用廣，而且也被其他學科領域廣為采用。本試劑盒工作原理如下圖所示。
二、已配試劑
ELISA試劑盒中配備以下條目：
1、96孔已包被好的酶標板
2、標準1：0.1 ng/mL的MC-LR標準溶液
3、標準2：0.2 ng/mL的MC-LR標準溶液
4、標準3：0.5 ng/mL的MC-LR標準溶液
5、標準4：1 ng/mL的MC-LR標準溶液
6、標準5：2 ng/mL的MC-LR標準溶液
7、1瓶溶液1 （單抗）
8、1只溶液2 (此溶液僅為二抗稀釋所用，并非二抗溶液，請按稀釋比例量取！)
9、二抗（小管內含2.4 μL酶標二抗，4℃保存）。
10、1瓶溶液3（底物溶液）
11、1瓶溶液4 （終止液）
12、1袋固體PBS（配置洗滌液用）
13、1只Tween 20 （配置洗滌液用）
三、操作步驟
1、分別吸取50 μL毒素標準品或樣品與對應的孔中（參照表1），然后吸取50 μL單克隆抗體（溶液1）加入每孔中，輕輕混勻。37oC或室溫放置90分鐘。注意：必須先加標準品或樣品，再加單克隆抗體溶液。
2、洗板
在水池邊快速甩出酶標板中的液體。用吸管吸取洗滌液，加入板孔中，洗滌液量以加滿但不溢出板孔為宜。甩出洗滌液，再加洗滌液，重復上述操作三次，每次操作3分鐘。在濾紙上拍干。若有洗板機，可直接在洗板機上操作。
注意：切忌溢出互混！
3、每孔加入100 μL酶標二抗稀釋液，37oC或室溫放置30分鐘。
4、洗板
同2方法，此步驟必須洗滌五次，每次3分鐘。
5、加底物溶液3
立即用排槍或吸管吸取此種溶液，分別加于板孔中，每孔100 μL，置37oC或室溫顯色，經(jīng)常觀察，顯色時間不超過30分鐘。
6、終止反應
有明顯顏色顯示后，立即加50 μL 溶液4 1 mol/L H2SO4終止反應。
7、判斷結果
肉眼觀察（白色背景），陰性對照孔應明顯黃色。
測光密度，酶標儀取λ=450 nm。注意：加終止液后，30分鐘以內檢測。
注意：滴加試劑量要準，且試劑不可從一孔流到另一孔中，每種試劑對應一種吸管（或槍頭），不能混淆。
